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Visualizzazioni: 19 Autore: Editor del sito Publish Tempo: 2024-05-16 Origine: Sito
Le proteine sono le sostanze fondamentali delle attività della vita e la loro diversità nella struttura e nella funzione determina la loro importanza nella biomedicina, nella ricerca di biologia molecolare e nella produzione industriale. La separazione e la purificazione delle proteine sono passaggi cruciali nel campo della biotecnologia e il solfato di ammonio, come precipitante proteico comunemente usato, svolge un ruolo importante nel processo di purificazione delle proteine.
La purificazione delle proteine è un prerequisito per garantire l'accuratezza della ricerca e dell'applicazione delle proteine. Le proteine purificate possono essere utilizzate per:
Analisi strutturale, come cristallografia a raggi X, risonanza magnetica nucleare (NMR), ecc.
Ricerca funzionale, come cinetica enzimatica, caratteristiche di legame, ecc.
Sviluppo di farmaci: come obiettivo di droga o farmaco stesso.
Applicazioni industriali: come catalizzatori, additivi alimentari, ecc.
L'ammonio solfato (NH4) 2SO4) è un sale inorganico conveniente e la sua applicazione nella purificazione proteica si basa principalmente sulla sua capacità di indurre precipitazioni proteiche.
L'ammonio solfato aumenta la forza ionica della soluzione, riduce la forza repulsiva tra molecole proteiche e promuove l'aggregazione e la precipitazione delle molecole proteiche. Questo metodo si chiama 'precipitazione del sale '.
La solubilità di diverse proteine varia a diverse concentrazioni di solfato di ammonio, il che consente la precipitazione selettiva delle proteine bersaglio aumentando gradualmente la concentrazione di solfato di ammonio.
Il solfato di ammonio è considerato una sostanza inerte che è meno inclini a reazioni non specifiche con le proteine, contribuendo a proteggere la struttura naturale e la funzione delle proteine.
In primo luogo, è necessario abbattere le cellule e rilasciare proteine intracellulari attraverso metodi fisici o chimici.
Aggiungere il solfato di ammonio a una certa concentrazione per precipitare la maggior parte delle proteine e rimuovere le impurità.
Aumentare gradualmente la concentrazione di solfato di ammonio e precipitare la proteina bersaglio.
Resuspendere la proteina precipitata in tampone e lavare per rimuovere le impurità residue.
Se necessario, potrebbe anche essere necessario purificare ulteriormente la proteina mediante cromatografia a scambio ionico, cromatografia di filtrazione in gel o cromatografia di affinità.
Efficacia dei costi: il solfato di ammonio è economico e adatto per applicazioni su larga scala.
Facile da utilizzare: il processo di sedimentazione è semplice e non richiede apparecchiature complesse.
Attività protettiva: ha un impatto minimo sulla struttura naturale e sulla funzione delle proteine.
Risoluzione limitata: è difficile distinguere le proteine con proprietà simili.
Possibili impurità: il solfato di ammonio stesso può introdurre impurità, che devono essere rimosse nei passaggi successivi.
Con l'approfondimento della ricerca sulle proteine, anche i requisiti per la tecnologia di purificazione delle proteine sono in costante aumento. La purificazione del solfato di ammonio in futuro può essere combinata con tecnologie più moderne, come: ad esempio:
Tecnologia cromatografica ad alta risoluzione: migliora la risoluzione della purificazione e distingue più proteine.
Automazione e miniaturizzazione: miglioramento dell'efficienza operativa e dell'accuratezza.
Chimica verde: riduzione del consumo chimico e inquinamento ambientale.
Il solfato di ammonio, come tradizionale precipitante proteico, svolge un ruolo insostituibile nel campo della purificazione delle proteine. La sua efficacia in termini di costi, un facile funzionamento e protezione dell'attività proteica lo hanno reso ampiamente utilizzato nei processi di purificazione delle proteine. Con lo sviluppo della scienza e della tecnologia, la tecnologia di purificazione del solfato di ammonio dovrebbe essere combinata con la tecnologia moderna per migliorare ulteriormente l'efficacia e l'efficienza della purificazione delle proteine, fornendo un supporto più forte per la ricerca e l'applicazione delle proteine.
