Die Verwendung der Ammoniumsulfat -Proteinreinigung

Die Anwendung von Ammoniumsulfat bei der Proteinreinigung

Proteine ​​sind die grundlegenden Substanzen der Lebensaktivitäten, und ihre Vielfalt in Struktur und Funktion bestimmt ihre Bedeutung für Biomedizin, molekulare Biologieforschung und industrielle Produktion. Die Trennung und Reinigung von Proteinen sind entscheidende Schritte auf dem Gebiet der Biotechnologie, und Ammoniumsulfat als häufig verwendeter Protein -Niederschlagsmittel spielt eine wichtige Rolle im Proteinreinigungsprozess.

1. Die Bedeutung der Proteinreinigung

Die Proteinreinigung ist eine Voraussetzung für die Gewährleistung der Genauigkeit der Proteinforschung und -anwendung. Gereinigte Proteine ​​können verwendet werden für:

Strukturanalyse wie Röntgenkristallographie, nukleare Magnetresonanz (NMR) usw.

Funktionelle Forschung wie Enzymkinetik, Bindungseigenschaften usw.

Arzneimittelentwicklung: Als Drogenziel oder Drogen selbst.

Industrieanwendungen: Katalysatoren, Lebensmittelzusatzstoffe usw.

2. Die Rolle von Ammoniumsulfat bei der Proteinreinigung

Ammoniumsulfat (NH4) 2SO4) ist ein kostengünstiges anorganisches Salz, und seine Anwendung bei der Proteinreinigung basiert hauptsächlich auf der Fähigkeit, Proteinniederschlag zu induzieren.

2.1 Salzausfällung

Ammoniumsulfat erhöht die Ionenstärke der Lösung, verringert die abstoßende Kraft zwischen Proteinmolekülen und fördert die Aggregation und die Ausfällung von Proteinmolekülen. Diese Methode wird als 'Salzausfällung' bezeichnet.

2.2 Selektiver Niederschlag

Die Löslichkeit verschiedener Proteine ​​variiert bei verschiedenen Konzentrationen von Ammoniumsulfat, was eine selektive Ausfällung von Zielproteinen ermöglicht, indem die Konzentration von Ammoniumsulfat allmählich erhöht wird.

2.3 Schutz der Proteinaktivität

Ammoniumsulfat wird als inerte Substanz angesehen, die weniger anfällig für nicht spezifische Reaktionen mit Proteinen ist, was dazu beiträgt, die natürliche Struktur und Funktion von Proteinen zu schützen.

3. Schritte des Ammoniumsulfatreinigungsprozesses

3.1 Zellfragmentierung

Erstens ist es notwendig, Zellen abzubauen und intrazelluläre Proteine ​​durch physikalische oder chemische Methoden freizusetzen.

3.2 Vorab -Screening und Sedimentation

Fügen Sie Ammoniumsulfat zu einer bestimmten Konzentration hinzu, um den größten Teil des Proteins auszurüsten und Verunreinigungen zu entfernen.

3.3 Re Screening Niederschlag

Erhöhen Sie allmählich die Konzentration von Ammoniumsulfat und schließen das Zielprotein aus.

3.4 Resuspension und Waschen

Stellen Sie das ausgefällte Protein in Puffer und waschen Sie die Restverunreinigungen durch.

3.5 Weitere Reinigung

Bei Bedarf muss das Protein möglicherweise auch durch Ionenaustauschchromatographie, Gelfiltrationschromatographie oder Affinitätschromatographie weiter gereinigt werden.

4. Vor- und Nachteile der Ammoniumsulfatreinigung

Vorteil

Kosteneffektivität: Ammoniumsulfat ist kostengünstig und für groß angelegte Anwendungen geeignet.

Einfach zu bedienen: Der Sedimentationsprozess ist einfach und erfordert keine komplexe Ausrüstung.

Schutzaktivität: Hat einen minimalen Einfluss auf die natürliche Struktur und Funktion von Proteinen.

Mangel

Begrenzte Auflösung: Es ist schwierig, Proteine ​​mit ähnlichen Eigenschaften zu unterscheiden.

Mögliche Verunreinigungen: Ammoniumsulfat selbst kann Verunreinigungen einführen, die in nachfolgenden Schritten entfernt werden müssen.

5.Zukünftige Trends bei der Ammoniumsulfatreinigung

Mit der Vertiefung der Proteinforschung nimmt auch die Anforderungen an die Proteinreinigungstechnologie ständig zu. Die Reinigung von Ammoniumsulfat in Zukunft kann mit moderneren Technologien kombiniert werden, wie z.

Hochauflösende Chromatographie -Technologie: Verbessert die Reinigungsauflösung und unterscheidet mehr Proteine.

Automatisierung und Miniaturisierung: Verbesserung der betrieblichen Effizienz und Genauigkeit.

Grüne Chemie: Reduzierung des chemischen Verbrauchs und Umweltverschmutzung.

Epilog

Ammoniumsulfat spielt als traditioneller Proteinfeilbilder eine unersetzliche Rolle im Bereich der Proteinreinigung. Die Kostenwirksamkeit, der einfache Betrieb und der Schutz der Proteinaktivität haben es in Proteinreinigungsprozessen häufig verwendet. Mit der Entwicklung von Wissenschaft und Technologie wird erwartet, dass die Ammoniumsulfat -Reinigungstechnologie mit moderner Technologie kombiniert wird, um die Wirksamkeit und Effizienz der Proteinreinigung weiter zu verbessern und eine stärkere Unterstützung für Proteinforschung und Anwendung zu bieten.